अल्फा-एमाइलेज पाउडरसिस्टम का नाम 1, 4- - डी-ग्लूकेन ग्लूकेन हाइड्रोलेस है, जिसे तरलीकृत एमाइलेज, तरलीकृत एंजाइम - 1, 4- डेक्सट्रिनेज़ के रूप में भी जाना जाता है। पीले-भूरे ठोस पाउडर या पीले-भूरे से गहरे भूरे रंग के तरल, 5 प्रतिशत ~ 8 प्रतिशत पानी की मात्रा के साथ। पानी में घुलनशील और बफर समाधान पतला, इथेनॉल में लगभग अघुलनशील। जैव रासायनिक अनुसंधान। यह स्टार्च को तेजी से द्रवीभूत कर सकता है और कम आणविक भार बना सकता है।
1. खाद्य प्रसंस्करण: आटा उद्योग में एक सुरक्षित और कुशल सुधारक के रूप में।अल्फा-एमाइलेज पाउडररोटी की गुणवत्ता में सुधार कर सकते हैं। A-amylase में द्रवीकरण और पवित्रीकरण होता है, और अक्सर पेय उद्योग में स्वीटनर के रूप में उपयोग किया जाता है। कोल्ड ड्रिंक्स में, कोल्ड ड्रिंक्स की चिपचिपाहट कम हो जाती है और उच्च स्टार्च वाले कोल्ड ड्रिंक्स का स्वाद सुनिश्चित करने के लिए तरलता बढ़ा दी जाती है। उच्च तापमान a-amylase, एक नए प्रकार के द्रवीकरण एंजाइम की तैयारी के रूप में, किण्वन उद्योग में व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। इसकी थर्मल स्थिरता प्रोटीन की थर्मल स्थिरता से ही निर्धारित होती है, इसलिए इसका व्यापक रूप से अल्कोहल और बियर ब्रूइंग उद्योग में उपयोग किया जाता है।
2. फ़ीड उद्योग: आहार में बहिर्जात ए-एमाइलेज जोड़ने से युवा जानवरों को पचाने और स्टार्च का उपयोग करने में मदद मिल सकती है, और इसके विकास प्रदर्शन और फ़ीड रूपांतरण दर बहुत फायदेमंद होती है। ब्रायलर आहार में ए-एमाइलेज का उत्पादन करने वाले लाइव एस्चेरिचिया कोली कल्चर को शामिल करने से एंटीबायोटिक विकास प्रमोटर की भूमिका निभा सकते हैं, आंतों की आकृति विज्ञान में सुधार कर सकते हैं और उत्पादन प्रदर्शन में सुधार कर सकते हैं।
3. जल धुलाई उद्योग: क्योंकि स्टार्च सस्ता है, प्राप्त करना आसान है, और हटाने में आसान है, इसका उपयोग आधुनिक फाइबर निर्माण प्रक्रिया में यार्न के टूटने को रोकने के लिए एक सुरक्षात्मक सामग्री के रूप में किया जाता है, और फिर ए-एमाइलेज के साथ इलाज किया जाता है, जो स्टार्च को चुनिंदा रूप से हटा सकता है। यार्न फाइबर को नुकसान पहुँचाए बिना घोल, और स्टार्च को पानी में घुलनशील डेक्सट्रिन में भी नीचा दिखा सकता है, जिससे इसे धोना आसान हो जाता है।
4. फार्मास्युटिकल उद्योग: क्योंकि Aspergillus niger a-amylase एसिड-प्रतिरोधी है, इसका उपयोग पाचन में मदद करने के लिए दवाओं के निर्माण, गैस्ट्रिक एसिड वातावरण के लिए उपयुक्त एसिड-प्रतिरोधी a-amylase विकसित करने और पाचन सहायक तैयार करने के लिए किया जा सकता है।
5. कागज उद्योग: एमाइलेज का उपयोग मुख्य रूप से कागज उद्योग में कागज कोटिंग स्टार्च की चिपचिपाहट और एकाग्रता में सुधार के लिए किया जाता है। पेस्ट एक अच्छी पेपर कोटिंग है, जो कागज की कठोरता और ताकत में सुधार कर सकती है और कागज के घर्षण को बढ़ा सकती है। हालांकि, पेपर साइजिंग के लिए प्राकृतिक स्टार्च एकाग्रता बहुत अधिक है, इसलिए इसे एमाइलेज द्वारा स्टार्च के आंशिक गिरावट से समायोजित किया जा सकता है।
विभिन्न स्रोतों से - एमाइलेज के गुणों में कुछ अंतर हैं, और उद्योग में मुख्य रूप से कवक और बैक्टीरिया का उपयोग किया जाता है - एमाइलेज। वर्तमान में, - एमाइलेज का व्यापक रूप से फ़ीड, विकृत स्टार्च और स्टार्च चीनी, बेकिंग उद्योग, बीयर ब्रूइंग, शराब उद्योग, किण्वन, कपड़ा और अन्य उद्योगों में उपयोग किया जाता है। यह एक महत्वपूर्ण औद्योगिक एंजाइम है।
6. एंजाइम की तैयारी। एस्परगिलस नाइगर से बने उत्पाद मुख्य रूप से स्टार्च सिरप, अल्कोहल, बीयर, जूस, चॉकलेट सिरप, बेक्ड उत्पाद, तरल कॉफी, शराब, ग्लूकोज और डेयरी उत्पादों में उपयोग किए जाते हैं। Aspergillus oryzae से निर्मित, यह मुख्य रूप से स्टार्च सिरप, शराब, बीयर, पके हुए उत्पादों, डेयरी उत्पादों और मांस को नरम बनाने के लिए उपयोग किया जाता है। खमीर से निर्मित, यह मुख्य रूप से कैंडी और आइसक्रीम के निर्माण और डेयरी उत्पादों के संशोधन में उपयोग किया जाता है। ट्राइकोडर्मा से निर्मित, यह मुख्य रूप से रस, शराब, वनस्पति तेल और बियर उत्पादन में प्रयोग किया जाता है। Rhizopus oryzae से निर्मित, यह मुख्य रूप से स्टार्च सिरप, रस की तैयारी, पनीर उत्पादन और ग्लूकोज के लिए प्रसंस्करण सहायता के रूप में उपयोग किया जाता है।
7. यह उत्पाद बीयर, राइस वाइन, सॉस, मोनोसोडियम ग्लूटामेट और एंटीबायोटिक्स का उत्पादन करने के लिए स्टार्च के हाइड्रोलिसिस को उत्प्रेरित कर सकता है और इसका उपयोग ग्लूकोज, माल्टोज़ और डेक्सट्रिन के उत्पादन के लिए भी किया जा सकता है। चीन के नियमों के अनुसार, इसका उपयोग किण्वित शराब, आसुत शराब, शराब और स्टार्च सिरप के उत्पादन में किया जा सकता है, और इसका उत्पादन आवश्यकताओं के अनुसार उचित रूप से उपयोग किया जा सकता है।
8. स्टार्च को डेक्सट्रिन में द्रवीभूत किया जाता है, जिसका उपयोग शिशु आहार निर्माण, अनाज प्रसंस्करण, बीयर उत्पादन, रस प्रसंस्करण, बाईजीउ उत्पादन आदि में किया जाता है। यह सबसे व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले और उपभोग किए जाने वाले एंजाइमों में से एक है।
9. अल्फा-एमाइलेज पाउडर- 1, 4-ग्लूकोसाइड बांड को हाइड्रोलाइज कर सकते हैं, अलग-अलग लंबाई के साथ शॉर्ट चेन डेक्सट्रिन को मनमाने ढंग से काट सकते हैं और कम आणविक चीनी, डायरेक्ट स्टार्च और एमाइलोपेक्टिन की एक छोटी मात्रा अनियमित रूप में विघटित हो जाती है, ताकि चिपचिपाहट स्टार्च का पेस्ट तेजी से घटता है।
की तैयारीअल्फा-एमाइलेज पाउडर:
(1) वाहक pxmj 19-aph213 की तैयारी।
सदिश pxmj19-aph213 की निर्माण प्रक्रिया इस प्रकार है:
Aph213 जीन वेक्टर xk99e से प्राइमर aph213F और aph213R के साथ प्रवर्धित किया गया था। इस्तेमाल किए गए प्राइमर इस प्रकार थे:
aph213F:ccggatcagcttcacgctgccgcaagcac
aph213R:ccgaagcttaattctgtttcctgtgtgaaattg
पीसीआर स्थितियां इस प्रकार हैं: 4 मिनट के लिए 95 डिग्री; 95 डिग्री 30s, 62 डिग्री 30s, 72 डिग्री 1min, 35 चक्र; 72 डिग्री 7 मिनट।
उपरोक्त प्राइमरों के डिजाइन ने aph213 जीन के प्रवर्धन के दौरान aph213 जीन के अपस्ट्रीम में EcoRV ब्रेकपॉइंट और डाउनस्ट्रीम में HindIII ब्रेकपॉइंट के गठन का नेतृत्व किया। Aph213 जीन का न्यूक्लियोटाइड अनुक्रम SEQ ID NO: 4 में दिखाया गया है; PCR उत्पाद को EcoRV और HindIII के साथ पुनर्प्राप्त और डाइजेस्ट किया गया था, और फिर वेक्टर pxmj-19 से जोड़ा गया था, जिसे वेक्टर pxmj19-aph213 प्राप्त करने के लिए T4DNA ligase के माध्यम से EcoRV और HindIII के साथ भी डाइजेस्ट किया गया था।
सदिश pxmj19-aph213 की प्रवर्धन प्रक्रिया इस प्रकार है:
ए एलबी संस्कृति माध्यम के 3 मिलीलीटर और 34 मिलीग्राम / एमएल क्लोरैम्फेनिकॉल एंटीबायोटिक के 1.5ul को 50 मिलीलीटर अपकेंद्रित्र ट्यूब में जोड़ें;
B. वेक्टर pxmj19-aph213 के साथ Escherichia coli DH5 का चयन करें, pxmj19-aph213 प्लाज्मिड को बढ़ाने के लिए 12 घंटे के लिए 37 डिग्री और 230 rpm पर उपरोक्त माध्यम और कल्चर में स्थानांतरित करें;
C. प्लाज्मिड निष्कर्षण किट के निर्देशों के अनुसार pxmj 19-aph213 प्लाज्मिड को निकालें।
(2) बैसिलस सबटिलिस - एमाइलेज जीन का प्रवर्धन और संशोधन।
प्राइमर AmyF और AmyR के साथ बेसिलस सबटिलिस जीनोम से प्रवर्धित - एमाइलेज जीन के लिए उपयोग किए जाने वाले प्राइमर इस प्रकार हैं:
AmyR:ccgctcgagtcagtggtggtggtggtggtgatggggaagagaaccgctaag;
AmyF:ccgaagcttgaaaggaggacctaatgtttgcaaaacgattcaaaac;
पीसीआर स्थितियां इस प्रकार हैं: 4 मिनट के लिए 95 डिग्री; 95 डिग्री 30s, 62 डिग्री 30s, 72 डिग्री 2min, 35 चक्र; 72 डिग्री 7 मिनट।
उपरोक्त प्राइमरों का डिज़ाइन बनाता है - एमाइलेज जीन के प्रवर्धन के दौरान - एमाइलेज जीन के अपस्ट्रीम में ई3 एसडी अनुक्रम बनता है और डाउनस्ट्रीम में हिस्टडीन टैग बनता है। अपस्ट्रीम प्रतिबंध एंडोन्यूक्लिज साइट HindIII है, और डाउनस्ट्रीम प्रतिबंध एंडोन्यूक्लिज़ साइट XhoI है;
(3) पुनः संयोजक वेक्टर का निर्माण।
PCR उत्पाद XhoI और HindIII के साथ पुनर्प्राप्त और डाइजेस्ट किया गया था, और फिर वेक्टर pxmj19-aph213 से जुड़ा था जिसे XhoI और HindIII के साथ T4 DNA ligase के माध्यम से रिकॉम्बिनेंट एक्सप्रेशन वेक्टर pxmj19-aph प्राप्त करने के लिए भी डाइजेस्ट किया गया था 213-एमी।
(4) पुनः संयोजक जीवाणुओं का निर्माण।
पुनः संयोजक अभिव्यक्ति वेक्टर pxmj19-aph213-amy को पूर्व-प्रवर्धन के लिए Escherichia coli में स्थानांतरित किया गया था। कल्चर माध्यम एलबी माध्यम था और क्लोरैम्फेनिकॉल की सांद्रता 50 माइक्रोग्राम/एमएल थी; निष्कर्षण के बाद, इसे विद्युत परिवर्तन की विधि द्वारा Corynebacterium glutamicum में स्थानांतरित किया गया था, और 30 ug / ml के क्लोरैमफेनिकॉल की सांद्रता के साथ 30 डिग्री पर LBHIS रिकवरी माध्यम में सुसंस्कृत किया गया था।
(5) संवर्धन पुनः संयोजक बैक्टीरिया और स्रावित अभिव्यक्ति - एमाइलेज।
संस्कृति के लिए 50 मिलीलीटर माध्यम वाले 250 मिलीलीटर त्रिकोणीय फ्लास्क में उगाए गए ट्रांसफार्मर को स्थानांतरित करें। माध्यम बीएचआई माध्यम है। संस्कृति की स्थिति 30 डिग्री, 230 आरपीएम, 48 घंटे है।
（6） अल्फा-एमाइलेज पाउडरएमाइलेज की।
A. 12000 rpm, 4 डिग्री और 5 मिनट पर रिकॉम्बिनेंट बैक्टीरिया के कल्चर को सेंट्रीफ्यूज करें - एमाइलेज का सुपरनेटेंट।
बी शामिल होगा - एमाइलेज का सतह पर तैरनेवाला आत्मीयता क्रोमैटोग्राफी के अधीन है। सबसे पहले, निकल स्तंभ को बफर ए के साथ संतुलित करें - एमाइलेज के सतह पर तैरनेवाला फ़िल्टर किया गया था और संतुलित निकल स्तंभ में लोड किया गया था, और फिर तीन स्तंभों की मात्रा को बफर ए के साथ बेसलाइन स्तर तक संतुलित किया गया था; 100mmol B विलयन के साथ Elute, eluted eluate एकत्र करें, और प्रति ट्यूब 0.5ml एकत्र करें;
बफर ए: 3 0 0 एमएम NaCl, 20 एमएम ट्रिस, पीएच 8.0 बफर; बफर बी: 300mM NaCl, 250mM imidazole, 20mM Tris, pH8.0 बफर।
C. युक्त लोगों के लिए - एमाइलेज के एल्यूएट को डिसाल्टिंग कॉलम के माध्यम से डीसाल्टिंग कॉलम के माध्यम से शुद्ध किया जाता है - एमाइलेज समाधान, - 20 डिग्री पर संग्रहीत;
डीसाल्टिंग के लिए इस्तेमाल किया जाने वाला बफर पीएच 7.0 के साथ 5 0 एमएम पीबीएस बफर है।
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