थियाज़ोलिल ब्लू कैस 298-93-1

थियाज़ोलिल नीलाआणविक सूत्र C18H16BRN5S . पीला या नारंगी पाउडर, पिघलने बिंदु: 195 डिग्री (अपघटन) . के साथ एक कार्बनिक यौगिक है, लेकिन मेथनॉल में थोड़ा घुलनशील, लेकिन शायद ही पानी या इथेनॉल . में घुलनशील हो। DMSO . में भंग कर दिया जाता है, यह अक्सर 5mg/ml स्टॉक समाधान में तैयार किया जाता है . यह आमतौर पर प्रयोगशाला विश्लेषणात्मक अभिकर्मक के रूप में उपयोग किया जाता है .}

थियाज़ोलिल नीला, रासायनिक नाम 3- (4, 5- dimethyl -2- thiazole) -2, 5- diphenyltetrazolium Bromide, abbreviated के रूप में mtt {6} {6} { विकास और अस्तित्व 1983 में, MTT को व्यापक रूप से जीवन विज्ञान, चिकित्सा अनुसंधान और दवा विकास जैसे क्षेत्रों में लागू किया गया है . निम्नलिखित अपने उद्देश्य की एक विस्तृत व्याख्या है:

कोशिका जीव विज्ञान में आवेदन

 

सेल संस्कृति के दौरान सेल प्रसार . का निर्धारण करने के लिए MTT क्लासिक तरीकों में से एक है, डिहाइड्रोजनेसेस जैसे कि लाइव सेल माइटोकॉन्ड्रिया में सक्सिनेट डिहाइड्रोजनेज जैसे डिहाइड्रोजनेज, बहिर्जात MTT को कम कर सकता है। कोशिकाओं में फॉर्माज़ान को भंग करना और विशिष्ट तरंग दैर्ध्य (जैसे कि 490nm या 562nm) पर इसके प्रकाश अवशोषण मूल्य को मापना एक एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉर्बेंट परख (एलिसा) पाठक का उपयोग करके, लाइव कोशिकाओं की संख्या अप्रत्यक्ष रूप से परिलक्षित हो सकती है {{6} मापा अवशोषण मान (od मान) . के आधार पर

कोशिका जीव विज्ञान में आवेदन

 

MTT का उपयोग इन विट्रो . में सुसंस्कृत कोशिकाओं पर दवाओं या अन्य उपचार विधियों (जैसे विकिरण विकिरण) की विषाक्तता को निर्धारित करने के लिए भी किया जा सकता है, उपचार समूह और नियंत्रण समूह के OD मानों की तुलना करके, सेल गतिविधि पर दवाओं या उपचार विधियों के प्रभाव का मूल्यांकन किया जा सकता है {. OD मान, मजबूत कोशिका गतिविधि; इसके विपरीत, यह इंगित करता है कि कमजोर सेल गतिविधि या अधिक से अधिक सेल विषाक्तता . इस विधि में ड्रग स्क्रीनिंग, टॉक्सिकोलॉजी अनुसंधान, और अन्य क्षेत्रों में व्यापक अनुप्रयोग हैं . हालांकि MTT का उपयोग मुख्य रूप से सेल प्रसार और साइटोटॉक्सिसिटी को मापने के लिए किया जाता है। एपोप्टोसिस, सेल में परिवर्तन के अंदर एंजाइम गतिविधि, जो एपोप्टोटिक कोशिकाओं और सामान्य कोशिकाओं के बीच ओडी मूल्यों में अंतर की तुलना करके एमटीटी . की कम करने की क्षमता को प्रभावित कर सकती है, सेल एपोप्टोसिस की घटना को पहले से निर्धारित किया जा सकता है . हालांकि, यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि एमटीटी एक विशेष तरीके से पता चलता है, व्यापक रूप से अन्य एपोप्टोसिस डिटेक्शन विधियों के साथ संयोजन में विश्लेषण किया गया .

दवा विकास में आवेदन

 

दवा के विकास की प्रक्रिया में, MTT परख एक आमतौर पर उपयोग की जाने वाली उच्च-थ्रूपुट ड्रग स्क्रीनिंग विधि . को कोशिकाओं के साथ परीक्षण दवा को इनक्यूबेट करके और MTT परख का उपयोग करके सेल गतिविधि में परिवर्तन को मापने के लिए, संभावित सक्रिय दवा अणुओं को जल्दी से जांचने के लिए किया जा सकता है . विकास . MTT परख का उपयोग ड्रग्स की कार्रवाई के तंत्र का अध्ययन करने के लिए भी किया जा सकता है . विभिन्न दवा उपचार स्थितियों के तहत सेल गतिविधि में परिवर्तनों की तुलना करके, सेल प्रसार और एपोप्टोसिस जैसी प्रक्रियाओं पर दवाओं का प्रभाव दवाओं के सिग्नलिंग मार्गों को और अधिक पता लगाया जा सकता है . दवा सुरक्षा मूल्यांकन में, MTT परख का उपयोग कोशिकाओं पर दवाओं के विषाक्त प्रभावों का आकलन करने के लिए किया जा सकता है . दवा उपचार के बाद कोशिकाओं के OD मूल्य परिवर्तनों को मापकर, यह निर्धारित करना संभव है कि क्या दवा के लिए colotoxiticity और विषाक्तता की ताकत है। ड्रग्स .

अन्य क्षेत्रों में MTT का अनुप्रयोग

 

इम्यूनोलॉजिकल रिसर्च में, एमटीटी परख का उपयोग एंटीजन या इम्यूनोस्टिमुलेंट्स के साथ लिम्फोसाइट्स को इनक्यूबेटिंग द्वारा लिम्फोसाइट्स . की प्रसार क्षमता को निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है और एमटीटी परख का उपयोग करके सेल गतिविधि में परिवर्तन को मापने के लिए, इम्यूसिस की प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की क्षमता, इस मेथड को इमिशन किया जा सकता है। फ़ील्ड . ऑन्कोलॉजी रिसर्च में, MTT परख का उपयोग ट्यूमर कोशिकाओं की प्रसार गतिविधि और दवा संवेदनशीलता को निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है . ट्यूमर कोशिकाओं के ओडी मूल्यों में परिवर्तन की तुलना करके, ट्यूमर कोशिकाओं पर निरोधात्मक प्रभाव के साथ दवा के अणुओं को {{{ ट्यूमर का उपचार . पर्यावरणीय विष विज्ञान अनुसंधान में, MTT परख का उपयोग कोशिकाओं पर पर्यावरण प्रदूषकों के विषाक्त प्रभावों का मूल्यांकन करने के लिए किया जा सकता है . प्रदूषकों के विभिन्न सांद्रता के साथ सह -ऊष्मायन कोशिकाओं द्वारा और MTT परख का उपयोग करके कोशिका गतिविधि में परिवर्तन को मापने के लिए, {this {this {the {the {the {this {this {this {this {this { पर्यावरण प्रदूषकों के पारिस्थितिक जोखिम और पर्यावरण संरक्षण नीतियों को तैयार करना . 

के प्रायोगिक चरणथियाज़ोलिल नीलातरीका:

1: ट्रिप्सिन लॉगरिदमिक चरण कोशिकाओं, सेंट्रीफ्यूज को पचाता है और सेल निलंबन बनाने के लिए समाप्ति के बाद उन्हें इकट्ठा करता है, और इसकी एकाग्रता को 5-10 को सेल काउंट × 104/एमएल . द्वारा शुरुआती लोगों के लिए समायोजित करता है। शुरू में कोशिकाओं की संख्या निर्धारित करने के लिए एक सरल विधि .

एक उदाहरण के रूप में सेल संस्कृति के लिए आमतौर पर उपयोग किए जाने वाले 25 सेमी 2 लें:

1) सेल घनत्व लगभग 80% ~ 90% है (नीचे दिया गया आंकड़ा 80% ~ 90% घनत्व पर कोशिकाओं की अनुमानित स्थिति को दर्शाता है) . पाचन और centrifugation के बाद, सतह पर तैरनेवाला निकालें, और इसे मिलाने के लिए 3ml माध्यम जोड़ें .}

2) एक नया 15ml बाँझ सेंट्रीफ्यूज ट्यूब लें (96- अच्छी तरह से प्लेट के टीकाकरण के अगले चरण के लिए) और इसे लगभग 9ml माध्यम से भरें

3) पहले चरण में तैयार किए गए 3ML सेल निलंबन से 1ml लें, इसे ऊपरी ट्यूब में जोड़ें, और इस समय . को मिलाने के बाद कोशिकाओं को गिनें, यह आम तौर पर 5-10 या उससे कम × 104/ml है, जो कि 4 कोशिकाओं के 4 कोशिकाओं में 5-10 कोशिकाओं के बराबर है। यदि एकाग्रता पर्याप्त नहीं है, तो सेल निलंबन को गिनती परिणाम के अनुसार जोड़ा जाएगा, और प्रत्येक ड्रॉप की गणना 50ul . के रूप में की जाएगी

4) कोशिकाओं की संख्या को प्रयोग के विभिन्न उद्देश्यों के अनुसार समायोजित किया जाना चाहिए . उदाहरण के लिए, सामान्य सेल प्रसार प्रयोग में, 2000 कोशिकाओं का उपयोग किया जा सकता है (2 × 104/एमएल के सेल निलंबन घनत्व के बराबर), 5000 से 10000 कोशिकाओं को अच्छी तरह से (5 अपनी स्वयं की विशेषताओं के अनुसार निर्धारित किया गया है, जैसे कि विकास की गति . उदाहरण के लिए, तेजी से बढ़ने वाली कोशिकाओं का घनत्व थोड़ा छोटा हो सकता है .

2. सेल सस्पेंशन तैयार करने के बाद, इसे धीरे से मिलाएं और प्रत्येक छेद में 100ul जोड़ें, ताकि परीक्षण किए जाने वाले कोशिकाओं का घनत्व 5000-10000/होल हो (किनारे का छेद बाँझ पीबीएस से भरा हो) .} .

एल नोट: क्योंकि कोशिकाएं मिश्रण के बाद बसती रहती हैं, टीकाकरण की प्रक्रिया के दौरान बार -बार मिश्रण करना आवश्यक है, जैसे कि हर छह छेदों को एक बार मिश्रण करना, यह सुनिश्चित करने के लिए कि टीकाकरण का सेल घनत्व छेदों के बीच बिल्कुल वैसा ही है, जो एमटीटी .} के परिणामों के लिए महत्वपूर्ण है।

3. इनोकेलेटेड सेल कल्चर प्लेट को इनक्यूबेटर में खेती के लिए डालें जब तक कि सेल मोनोलेयर को छेद के नीचे (96- होल फ्लैट प्लेट) के साथ कवर नहीं किया जाता है, और ड्रग को एकाग्रता ग्रेडिएंट . के साथ जोड़ दिया जाता है, जो कि बैक को जोड़ने के बाद होता है, लेकिन हम दो घंटे, या दो घंटे में जोड़ सकते हैं। अगली सुबह . आम तौर पर, 5-7 ग्रेडिएंट्स, 100ul प्रति छेद, और 3-5 कई छेद सेट किए जाते हैं . इसे 6 सेट करने के लिए अनुशंसित किया जाता है, अन्यथा वास्तविक स्थिति को प्रतिबिंबित करना मुश्किल है . निम्नलिखित आकृति का उपयोग 96-96-96- के लिए एक संदर्भ चरण के रूप में किया जा सकता है।

एल खुराक के लिए, कुछ लोग सीधे 96- में ड्रग्स जोड़ते हैं 96- अच्छी तरह से प्लेटों द्वारा अलग -अलग वॉल्यूम द्वारा एक एकाग्रता ढाल बनाने के लिए ., लेकिन मुझे लगता है कि हमें ईपी ट्यूब में दवाओं के विभिन्न सांद्रता को मिलाने की कोशिश करनी चाहिए, फिर 96- अच्छी तरह से cold के साथ संस्कृति को हटा दें। दवा एकाग्रता . की सटीकता, इसके अलावा, यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि यदि इस विधि का उपयोग किया जाता है, तो सभी 96- को चूसना न करें, अच्छी तरह से प्लेट कल्चर सॉल्यूशन को जोड़ने से पहले दवा . आपको नमूने जोड़ने के बाद ही इसे चूसने के बाद इसका एक हिस्सा चूसना चाहिए।

4 . 5% CO2 के साथ incubate 16-48 घंटे के लिए 37 डिग्री पर, और उल्टे माइक्रोस्कोप . के तहत दवा के प्रभाव का निरीक्षण करें। निम्नलिखित आंकड़ा साइटोटॉक्सिसिटी की एक विशिष्ट दवा ढाल दिखाता है।

4. प्रत्येक कुएं में 10ul mtt समाधान (5mg/ml, i . e . 0.5% mtt) जोड़ें और 4h . के लिए संस्कृति को जारी रखें।थियाज़ोलिल नीलासंस्कृति समाधान को सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद छोड़ दिया जा सकता है, और एमटीटी युक्त संस्कृति समाधान को 2-3 समय . के लिए पीबीएस के साथ धोए जाने के बाद जोड़ा जा सकता है

5. संस्कृति को रोकें और विघटन और क्रिस्टलीकरण के लिए तैयार करें .}

थियाज़ोलिल नीला, जिसका चीनी नाम मिथाइल ब्लू है, एक महत्वपूर्ण कार्बनिक यौगिक है जो चिकित्सा, जीव विज्ञान और रसायन विज्ञान में व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है . चिकित्सा में, इसका उपयोग अक्सर नाइट्राइट विषाक्तता, साइनाइड विषाक्तता, आदि . के लिए किया जाता है, और इसका उपयोग किया जाता है, और कुछ बीमारियों के लिए इस्तेमाल किया जाता है, ऊतक . हालांकि, कई दवाओं की तरह, मेथिलीन नीले रंग में भी उपयोग के दौरान दुष्प्रभावों की एक श्रृंखला हो सकती है:

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